A PCR, ou reacción en cadea da polimerase, é unha técnica utilizada para amplificar secuencias de ADN.Foi desenvolvido por primeira vez na década de 1980 por Kary Mullis, que foi galardoado co Premio Nobel de Química en 1993 polo seu traballo.A PCR revolucionou a bioloxía molecular, permitindo aos investigadores amplificar o ADN a partir de pequenas mostras e estudalo en detalle.
A PCR é un proceso de tres pasos que ten lugar nun termociclador, unha máquina que pode cambiar rapidamente a temperatura dunha mestura de reacción.Os tres pasos son desnaturalización, recocido e extensión.
No primeiro paso, a desnaturalización, o ADN de dobre cadea quéntase a unha temperatura elevada (xeralmente uns 95 °C) para romper os enlaces de hidróxeno que manteñen as dúas cadeas xuntas.Isto dá lugar a dúas moléculas de ADN monocatenario.
No segundo paso, o recocido, a temperatura redúcese a uns 55 °C para permitir que os cebadores se asocien ás secuencias complementarias do ADN monocatenario.Os cebadores son anacos curtos de ADN que están deseñados para coincidir coas secuencias de interese do ADN diana.
No terceiro paso, a extensión, a temperatura elévase a uns 72 °C para permitir que a polimerase Taq (un tipo de ADN polimerase) sintetiza unha nova cadea de ADN a partir dos cebadores.A polimerase Taq deriva dunha bacteria que vive en augas termais e é capaz de soportar as altas temperaturas utilizadas na PCR.
Despois dun ciclo de PCR, o resultado son dúas copias da secuencia de ADN diana.Ao repetir os tres pasos durante un número de ciclos (normalmente 30-40), o número de copias da secuencia de ADN diana pódese aumentar exponencialmente.Isto significa que ata unha pequena cantidade de ADN inicial pódese amplificar para producir millóns ou mesmo miles de millóns de copias.
A PCR ten numerosas aplicacións en investigación e diagnóstico.Úsase en xenética para estudar a función de xenes e mutacións, en medicina forense para analizar evidencias de ADN, no diagnóstico de enfermidades infecciosas para detectar a presenza de patóxenos e no diagnóstico prenatal para detectar trastornos xenéticos nos fetos.
A PCR tamén se adaptou para o seu uso nunha serie de variacións, como a PCR cuantitativa (qPCR), que permite medir a cantidade de ADN e a PCR de transcrición inversa (RT-PCR), que se pode usar para amplificar secuencias de ARN.
A pesar das súas moitas aplicacións, a PCR ten limitacións.Require coñecemento da secuencia diana e do deseño dos cebadores axeitados, e pode ser propenso a erros se as condicións de reacción non se optimizan correctamente.Non obstante, cun deseño e execución experimental coidadosos, a PCR segue sendo unha das ferramentas máis poderosas da bioloxía molecular.
Hora de publicación: 22-feb-2023